PCR en análisis de ADN

Los departamentos de policía, fiscales y laboratorios criminalísticos de todo el mundo han aprovechado el poder de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para ayudar en la investigación de las escenas del crimen.La PCR ayuda a crear perfiles de ADN, que sirven como un 'código de barras' único para cada individuo, lo que convierte a este en uno de los grandes ejemplos en los que la biología y la tecnología se fusionan para resolver problemas sociales.

¿EN QUÉ SOMOS DIFERENTES?

Al finalizar el Proyecto Genoma Humano, se ha determinado que el genoma está compuesto por aproximadamente 3 millones de bases.De estos, aproximadamente el 99,5% son idénticos en todos los humanos, lo que implica que, después de todo, no somos tan diferentes.

Se revela que la variación que observamos y que hace que cada uno de nosotros parezca único se debe principalmente a diferencias en el número de secuencias repetidas para regiones particulares del genoma.De estas regiones, se ha identificado la repetición corta en tándem (STR) y es la repetición más utilizada (que utiliza 13 loci o regiones) en la aplicación actual.

PERFIL DE ADN A TRAVÉS DE STR

STR se compone de 3-4 bases de nucleótidos repetidas que se encuentran en diferentes loci del genoma humano.Cada individuo hereda dos copias o alelos de sus padres, por lo que se podría construir un perfil STR.

Para diferentes poblaciones, se han utilizado varios loci como estándar en la identificación de individuos.Para coincidir con los perfiles STR, los números de repetición para cada alelo deben ser los mismos.Por ejemplo, en el locus D3S1358 (ver Figura 1), si la muestra obtenida tiene un perfil STR en ese locus de 7,5, entonces el sospechoso B ya está excluido para coincidir con la muestra obtenida.Si los perfiles de alelos coinciden, entonces la probabilidad se calcula dependiendo de la frecuencia del alelo para la ubicación particular.Esto implica que el sospechoso no es automáticamente la fuente definitiva de la muestra cuando los perfiles STR coinciden.

También se han establecido bases de datos para ayudar en el proceso de investigación, como el Sistema de índice combinado de ADN (CODIS), mantenido por el FBI de EE. UU.

PCR EN EL FLUJO DE TRABAJO DE PERFILES DE STR

1. Las investigaciones parten de la recolección de materiales biológicos como dientes, cabellos, huesos y fluidos de la escena del crimen.
2. Luego, las muestras se transfieren al laboratorio forense para su posterior procesamiento, donde se extrae el ADN de las muestras (~1 ng de muestra es adecuado para la PCR).

3. Los loci STR específicos se seleccionan y amplifican mediante PCR.Los fragmentos de PCR se analizan adicionalmente mediante secuenciación o electroforesis.

4. Luego se generan los perfiles STR y, si están disponibles, se verifican con perfiles o bases de datos sospechosos.
El perfilado STR requiere cicladores térmicos robustos para ayudar en el proceso de investigación.Se necesitan resultados confiables de la experimentación en laboratorios húmedos para ayudar a los departamentos de policía y a los fiscales en sus informes.Esco Lifesciences ofrece termocicladores con excelentes velocidades de calentamiento y enfriamiento, temperatura precisa y uniforme para garantizar perfiles STR confiables.